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上海撫生ELISA流程的說(shuō)明
點(diǎn)擊次數(shù):923 更新時(shí)間:2019-07-05

 

                                        上海撫生ELISA流程的說(shuō)明

   上海撫生物科技有限公司是一家專注于生物的技術(shù)企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的、銷售。并代理銷售,致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù),滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué) 、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué) ELISA試劑盒等生物科技實(shí)驗(yàn)需求。目前很多客戶因?yàn)閷?duì)品牌的信任度問(wèn)題,公司仍然是一個(gè)非常好的選擇上海撫生ELISA試劑盒,是 你不二的選擇。

剩余的試劑盒材料要妥善保存

標(biāo)準(zhǔn)品分裝后按說(shuō)明書(shū)要求的溫度保存,這樣可以避免污染,對(duì)要求冷凍保存的標(biāo)準(zhǔn)品還可以避免反復(fù)凍融;酶標(biāo)板放回錫箔紙袋,加入干燥劑,封緊封口,4℃保存。忌未將酶標(biāo)板*平衡至室溫,就放回錫箔紙袋,因?yàn)榇藭r(shí)由于溫度差,酶標(biāo)板上會(huì)有水汽,不利于穩(wěn)定保存。

加樣要快速準(zhǔn)確,避免氣泡

加樣時(shí)間宜控制在 15 分鐘內(nèi)。加樣前要將樣本混勻,特別是凍存后融化的樣本(自然融化的血清等樣本會(huì)有分層現(xiàn)象),應(yīng)上下顛倒充分混勻,注意動(dòng)作輕緩,避免產(chǎn)生氣泡。如凍存融化后的樣本有沉淀,可以再次離心。整個(gè)加樣過(guò)程都要注意避免產(chǎn)生氣泡。氣泡會(huì)影響蛋白的相互結(jié)合,而影響反應(yīng)進(jìn)行。

孵育時(shí)要保證溫度均勻,防止揮發(fā)變干

孵育時(shí)壓緊封口膜。多塊板一起實(shí)驗(yàn)時(shí),要平放各板,不要疊放,以免因溫度不均造成漂移或邊緣效應(yīng)。

洗板機(jī)的應(yīng)用

使用洗板機(jī),不但可以降低勞動(dòng)強(qiáng)度,而且有利于保證 ELISA 測(cè)試的穩(wěn)定性。目前的全自動(dòng)洗板機(jī)不但具有很多實(shí)用的洗滌動(dòng)作,如底部沖洗,兩點(diǎn)吸液,震動(dòng),交叉吸液;還可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)沖洗壓力,沖洗距離,沖洗時(shí)間等參數(shù)。通過(guò)優(yōu)選這些動(dòng)作和參數(shù),能保證良好的洗滌效果。洗板機(jī)的性能對(duì)于結(jié)果準(zhǔn)確性影響也很大,好的洗板機(jī)要保證洗板后的殘留液盡可能的少,一般不超過(guò) 2μL,以洗滌后用人工拍板墊紙不濕為準(zhǔn)。應(yīng)定期檢查抽吸針頭是否堵塞。洗液如果含有吐溫,應(yīng)隨用隨配。

手動(dòng)洗板的操作指南

加洗液要快速,沒(méi)有多道移液器可以使用洗瓶。洗液應(yīng)新鮮配制,以免被其他試劑污染,或染菌。加好洗液后浸泡 30s-1min。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水紙上拍板,選用無(wú)粉塵和碎屑的吸水紙。需要用力拍板,使孔內(nèi)沒(méi)有可見(jiàn)液體掛壁;但也不能太重,不能讓樣品干太久。酶標(biāo)板拍干后立即做后續(xù)的加液。

顯色反應(yīng)的關(guān)鍵點(diǎn)

ELISA 實(shí)驗(yàn)是個(gè)酶促底物顯色反應(yīng),隨時(shí)間增加,顯色變深,所以選擇*佳時(shí)間終止反應(yīng)是得到準(zhǔn)確的標(biāo)準(zhǔn)的曲線和樣本濃度的重要因素。終止過(guò)程要*。使用的 TMB 底物時(shí)*終止點(diǎn)是黃色,不會(huì)有任何程度的藍(lán)色或綠色,終止過(guò)程中必要時(shí)可以震蕩 96 孔板,或用槍頭抽吸混勻(終止液含強(qiáng)酸,避免腐蝕)。

 數(shù)據(jù)分析

按照說(shuō)明書(shū)推薦的數(shù)據(jù)分析方法做曲線擬合及分析。說(shuō)明書(shū)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線是在的實(shí)驗(yàn)室中,由非常有經(jīng)驗(yàn)的操作人員得到的結(jié)果??蛻舻臉?biāo)準(zhǔn)曲線和說(shuō)明書(shū)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線可能存在不同,但不等于不好。通常判斷標(biāo)準(zhǔn)曲線合格的標(biāo)準(zhǔn)為::背景OD 值 <0.2;點(diǎn) OD 值>1.0;相關(guān)系數(shù) R2 接近或等于 1。只要滿足這些條件的標(biāo)準(zhǔn)曲線都是可以使用的。

 

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